PolyLC色譜柱是在正相色譜基礎(chǔ)上變化的,用極性固定相及其部分水流動(dòng)相來執(zhí)行,一般用來純化分離多肽,核酸、碳水化合物、某些蛋白質(zhì)和極性溶劑。相比于其它材料,它提供了更加尖銳的峰和更好的選擇性和復(fù)蘇性。
應(yīng)用于:
1)分析代謝組學(xué)的極性小分子或者分析通過在等離子體或粗提取物中的特異小分子。
2)涉及到不同極性集團(tuán)的小肽分離和圖譜。
3)合成的或者天然的肽段或者片段的多維純化。
4)不溶于水介質(zhì)的溶質(zhì)的高效液相色譜。
5)從樣品中去除去污劑,脂肪,鹽。
使用高純硅膠和新一代端基封尾技術(shù),確保了良好的峰形和柱間重現(xiàn)性,同時(shí)擁有低柱壓、高保留和耐低pH的特點(diǎn),PolyLC色譜柱可以很方便的分離碳水化合物或直接流進(jìn)質(zhì)譜儀。低聚糖混合物也通常用其解決,雖然梯度洗脫通常是用于混合樣品,使用相同的運(yùn)行條件便可以解決,對(duì)比HPAEC和PAD檢測,在某些情況下的選擇性,兩者的運(yùn)行條件和設(shè)備的維護(hù)更加方便。
色譜柱在低pH流動(dòng)相中壽命縮短的主要原因是鍵合相在酸性條件下水解,這會(huì)導(dǎo)致保留時(shí)間和峰形的明顯改變;同時(shí)鍵合相水解會(huì)造成分析的檢測本底升高,影響方法的靈敏度和耐用性,在眾多的揮發(fā)性和非揮性緩沖溶液體系中表現(xiàn)出較大的穩(wěn)定性。
在中等pH值和相對(duì)稍高的溫度(如40℃)下使用磷酸鹽緩沖溶液會(huì)較大地縮短色譜柱壽命。然而,磷酸鹽緩沖液對(duì)于非LC-MS應(yīng)用來說是相當(dāng)理想的流動(dòng)相,它具有:好的紫外透光度;峰形和色譜分離選擇性;多個(gè)pKa值和很好的緩沖容量。